考研鸟课程内容修订
一、基础讲义
①第四章病毒与亚病毒
6.病毒的分类和命名
病毒的宿主范围是（微生物）（动物）（植物）
②第六章微生物的代谢
4.不同脱氢途径的产能（修正）
产能形式 | EMP/个 | HMP/个 | ED/个 | TCA/个 |
ATP | 2 | 1 | ||
GTP | 1 | |||
NADH+H+ | 2 相当5ATP | 1 相当2.5ATP | 4 相当10ATP | |
NADPH+H+ | 12 相当36ATP | 1 相当3ATP | ||
FADH2 | 1 相当1.5 | |||
总计 | 7 | 36 | 6.5 | 12.5 |
备注：一个NADH+H+产能相当2.5ATP
一个FADH2产能相当1.5ATP
1分子葡萄糖彻底氧化CO2:EMP+2TCA=7+12.5*2=32ATP
6.2 本章附历年真题
1.②微生物固氮包括（自生固氮）、共生固氮和（联合固氮）。（2007年）
③实验设计题
（四）蛋白的定位
单克隆抗体→细胞培养→免疫荧光染色→激光共聚焦
研究人员从细胞中分离鉴定了某一重要蛋白，现欲进一步分析该蛋白在细胞
中的定位，请设计实验。
原理：利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位
（1） 单克隆抗体的制备或者购买：该蛋白质通过杂交瘤技术制备单克隆抗体，挑选特异性的克隆株，制备出特异性的抗该种蛋白的单克隆抗体；如果已有该蛋白质的单克隆抗体销售，可以直接购买（目的是为了制备与目标蛋白能特异性结合的抗体，就是为了利用抗原抗体反应的这个特性）
（2）细胞培养：细胞在盖片上生长融合到95%-100%时，从孵箱中取出（正常的细胞培养过程，保持细胞活性，防止细胞过多产生自身的抑制）
（3）免疫荧光染色：培养后的细胞用预温的1× PBS洗三次，每次10分钟（维持细胞正常活性）；4%的甲醛室温固定20-30分钟；1× PBS洗三次，每次10分钟（目的是固定细胞，以便之后的操作）；0.2%Triton X—100透化2-5分钟；1× PBS洗三次，每次10分钟（对细胞进行通透处理，以保证之后的抗体能够达到抗原部位）；5%BSA室温封闭30分钟（使用封闭液对细胞进行封闭）；加一抗（用1%BSA稀释）放在湿盒里，4度过夜；1× PBS洗三次，每次10分钟；加二抗（用1%BSA稀释）30分钟，闭光 （一抗、二抗是抗体经过不同倍数稀释得到的，带有荧光标记）
注：二抗能起到信号放大的作用，如果仅仅依赖一抗，可能抗体的需要量以及光亮强度都会受到局限。即，一抗负责准确识别靶标分子，二抗负责信号放大。
（4）制片，激光共聚焦显微镜下观察，记录该蛋白在细胞中的位置（通过已经标记过的抗体找到抗原即蛋白质的位置）
二、习题
①习题二
11.蓝细菌中进行光合作用的场所是：（ ）
A. 羧酶体 B. 类囊体 C. 藻胆蛋白体
答案：B
②习题七
6.影响微生物生长的主要因素有___营养物质___、___水活度___、____温度___、___ pH ___、___氧含量___等。
或者：湿度、渗透压与水活度、辐射、超声波、消毒剂与化学疗剂，氧以外的其他气体等。（任选，还是以常见的为主）
③专题三
6、最适合于放线菌生长的培养基为（ ）。
a、马丁氏培养基 b、高氏一号培养基 c、PDA培养基 d、牛肉膏蛋白胨培养基
答案：B
④综合习题一
3缺壁细菌的主要类型有____ L型细菌____、___支原体____、____球状体 ____、___原生质体______。
4放线菌是一类呈菌丝生长和以孢子繁殖的原核生物，其菌丝有___气生菌丝___、___营养菌丝___和____孢子丝___三种类型。
三、真题
①2018年真题
填空题：
6.磷酸戊糖途径经氧化阶段的产物是可以提供还原力的（NADPH）和合成核苷酸所需要的(5-磷酸核酮糖)
简答题：
2.简述间隙灭菌的主要步骤及各步骤目的
答：
（1）间歇灭菌定义：适用于不耐高热的含糖或牛奶的培养基。
（2）间歇灭菌的主要步骤：
①用100℃、30分钟杀死培养基内杂菌的营养体
②将这种含有芽孢和孢子的培养基在温箱内或室温下放置24小时
③再以100℃处理半小时，再放置24小时。如此连续灭菌3次，每次间歇是将要灭菌的物体放到37℃孵箱过夜，即可达到完全灭菌的目的。
（2）各步骤的目的：
①杀灭大部分微生物，不包括芽孢。
②使芽孢和孢子萌发成为营养体
③目的是使芽孢发育成繁殖体，杀灭所有芽孢使其彻底清除。
②2011年真题
四、问答题
简述常用于获得微生物纯培养的5种分离技术。
答：纯培养技术包括两个基本步骤：(1)从自然环境中分离培养对象（2）在以培养对象为唯一生物种类的隔离环境中培养。增殖，获得这一生物种类的细胞群体。
①平板分离法：平板法常用Petri培养皿，它是一副互扣得平面盘。互扣的培养皿经过灭菌，内部保持无菌。将经过灭菌的固体培养基注入无菌的培养皿中，制成固体培养基平板。
②富集培养法：有些微生物在自然界中生存着，但分离和获得纯培养却十分困难，常采取富集培养的方法，作为纯培养的前处理。
③二元培养：是纯培养的一种特殊形式，有些寄生微生物只能在寄主微生物体内寄生，必须将寄生微生物和寄主微生物培养在一起，同时排除其他杂菌，即一种寄生细菌和一种噬菌体的“纯培养”
④共培养物：实际上组成了一个以利用某种基质为起点的生物链
⑤稀释倒平皿法：将待分离的材料用无菌水做一系列的稀释，取少许不同稀释液，分别与已融化并冷却到45℃左右的琼脂培养基混匀后倒入无菌培养皿，凝固后保温培养一段时间，挑取平板上分散的单菌落。
⑥平板划线法：是将已融化的培养基倒入无菌平皿中，凝固后用接种环挑取少许待分离材料，在培养基表面进行平行划线或其他形式的连续划线，微生物随着划线次数的增加而分散。
⑦单细胞挑取：是从待分离的材料中挑取一个细胞培养获得纯培养的方法
⑧选择培养基分离法：如果某种微生物的生长需求是已知的，可以设计一套特定环境使之特别适合这种微生物的生长。
备注：8种任选其中5种
四、课本—闵航
17页：第二行羟基改成羧基
19年真题简答题第二题“原核生物获取外源DNA的三种方式”改为转化，转导，接合，原生质体融合（可以在原核和真核中应用）
强化班讲义，第二章 原核微生物，课后真题四，匹配题，a选项的衣原体改为支原体